본 기술은 인체 티로시나아제 또는 티로시나아제 관련 단백질 1 유전자에 AOX1 프로모터, 알파-메이팅 팩터 신호 서열, 트윈-스트랩-태그, TEV 프로테아제 서열을 결합한 재조합 피키아 파스토리스 균주와, 이를 음이온 교환 크로마토그래피로 고순도 정제하는 방법입니다.
상업적으로 쓰이는 티로시나아제는 대부분 버섯 유래로, 인체 효소와 서열 상동성이 낮고 촉매 활성과 기질 특이성이 달라 미백 효능 평가의 정확도에 한계가 있었습니다. 대장균 발현계는 번역 후 변형이 불가능하고 곤충 유충 발현계는 시간과 비용이 많이 드는 문제가 있었습니다.
본 기술은 효모 분비 발현 시스템으로 인체형 티로시나아제를 생산하고 음이온 교환 컬럼과 투석 공정으로 정제하여 낮은 비용과 짧은 시간에 순도 높은 효소를 확보합니다. 미백 화장품 소재 스크리닝, 백색증 등 색소 질환 연구, 효소 구조 분석 분야에 적용될 수 있어 버섯 효소 대신 인체 효소 기준의 신뢰도 높은 효능 평가를 가능하게 합니다.
본 발명은 교육부의 인간 GPCR 단맛수용체와 감미물질과의 상호작용 연구 및 신개념 감미소재 개발 지원을 통해 개발되었습니다.
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